尼氏染色如何观察神经元

今天我们学习用尼氏染色观察海马区的组织结构。首先我们应该清楚什么是尼氏染色？尼氏染色主要染神经元中的尼氏体，尼氏体主要由粗面内质网和核糖体组成，里面含有大量RNA，会被染成深蓝紫色，所以细胞体和树突很容易辨认；轴突及轴丘则没有尼氏体。

我们了解完尼氏体后，接下来了解一下海马的组织学结构，在这里我们直接看图，针对各个海马的分区我做了一下的表格。其中，CA1、CA3、齿状回颗粒细胞层和齿状回门区是许多神经损伤研究中重点分析的区域。

不同损伤模型的易损区域并不完全相同。例如，缺血、癫痫持续状态、兴奋性毒性和慢性神经退行性改变，可能呈现不同的损伤分布，不能预先认定某个区域一定损伤最严重。

我们再来看局部的放大图，首先我们来看CA1/3区以及齿状回的正常结构，这片区域主要观察对象是锥体细胞层，主要应该关注：

1.神经元数量及排列：正常情况下，锥体细胞沿细胞层呈较为连续、规则的带状排列。但是在损伤时可能出现锥体细胞数量减少，以及细胞层可能出现局部稀疏、断裂或排列紊乱。甚至在严重损伤时，可见明显的神经元缺失区域。

2. 尼氏体的分布情况：尼氏体减少；尼氏体分布不均匀；尼氏体溶解或消失；胞质染色变浅。

上图为正常海马的尼氏染色切片，接下来观察其相应的病理改变。

齿状回（DG）的颗粒细胞层（gl）排列不规则。齿状回多形层（pl）中的大部分神经元已经丢失，但在多形层内侧部仍可见散在分布的细胞（有尾箭头）。海马CA2区似乎仍有部分神经元残存（白色有尾箭头）。此外，还可以清楚地看到，CA1区锥体细胞层的深部（星号）已无神经元。下托（S）和前下托（PrS）的形态基本正常，仅有少数病变区域细胞丢失。

我们再看局部神经元的高倍镜下的病理表现：可见尼氏体数量减少甚至消失；颗粒状结构变得不清晰；胞质染色变浅；尼氏体分布不均；出现尼氏体溶解

最后我们再来看一下CA2区。CA2区位于CA1和CA3之间，所以我们可以主要观察：锥体细胞层是否连续；神经元密度是否变化；胞体形态是否异常；尼氏体分布是否均匀；是否出现局部细胞丢失。我们还是直接看图：三个不同病例（病例12、21和13）的海马CA区（CA1–CA3）尼氏染色图像，分别对应CA1、CA2和CA3。 所有切片均取自海马体。（A–C） 三个病例的尼氏染色图片；（D–F） 为同一组尼氏染色切片中CA1、CA2和CA3区域的中尺度放大图。有尾箭头所指处显示了CA1锥体细胞层特征性的锯齿状不规则形态。注意CA1与CA2之间染色强度的差异，其中CA1的染色较浅。与CA2和CA3相比，CA1的神经元体积较小；而CA2与CA3的神经元大小及染色强度相近。与CA2相比，CA3神经元的排列方向更加一致，即排列方向更加一致。（D–F）中的无尾箭头表示锥体细胞层下缘的神经元聚集现象。比例尺：1 mm。

有一些小伙伴还会分析相关的数据，我也给大家找到了对应的文献以及分析的结果图。来源：《Long non-coding RNA H19 alleviates hippocampal damage in convulsive status epilepticus rats through the nuclear factor-κB signaling pathway》。

这篇文献中也有HE染色的统计结果《Anticonvulsant effect of glycitin in pentylenetetrazol induced male Wistar rat model by targeting oxidative stress and Nrf2/HO-1 signaling》，有需要的小伙伴也可以下载观看。

参考文献：

Dl-3-n-Butylphthalide Treatment Enhances Hemodynamics and Ameliorates Memory Deficits in Rats with Chronic Cerebral Hypoperfusion

Experimental Models of Status Epilepticus and Neuronal Injury for Evaluation of Therapeutic Interventions

Atlas de histología vegetal y animal

Neuropsychological and neuropathological observations of a long-studied case of memory impairment

Pentad: A reproducible cytoarchitectonic protocol and its application to parcellation of the human hippocampus