为什么电镜统计相关数据没有意义

自从做电镜相关领域以来，无数小伙伴都在后台询问如何在电镜照片中统计如何在电镜照片中统计线粒体数目、包涵体数量，以及线粒体与内质网之间的距离等数据。我都会告诉大家在电镜上统计这些数据毫无意义。今天我就以相关书籍为参考依据，把这个事情说透。

大家经常做电镜，也都知道超薄切片。但是大家具体了解过超薄切片到底有多薄，在这里我引用《医学生物细胞学》第七版第34页的原话：“镜检前必须将固定后的组织制成50 ～ 100 nm，即约细胞的1/200厚度的超薄切片”。所以咱们就以细胞为研究对象粗略统计：电镜照片内所呈现的内容仅仅为这个细胞的1/200，那能有什么说服力，常规统计学比较通常还要求至少3个重复，那你至少得做3个细胞也就是600张连续切片才够有说服力，但以目前的科研现状来看，这几乎是不可能做到的。

还有很多小伙伴想要统计比如线粒体个数，那我们就来看一看这个误差能有多大，我们还是看图。如果以蓝色线所示的角度作为切面，本来是一个线粒体，但是在二维图片中就是2个，所以后期数据统计就会有误差，不仅下图如此，其他例子也能说明这一点。

比如这张切片图中的那些圆形线粒体，都有可能实际上属于同一个线粒体，需要通过连续切片才能一探究竟。

还有小伙伴要统计细胞内包涵体的数量及相关指标。但是这项统计有多大误差，我特意找了一张连续切片的电镜图，将这件事说清楚。

图中标注的abc是包涵体，图1至图6是连续切片。在图1中，我们可以看到3个包涵体，所以单纯看这一张就3处病变。但是，通过连续切片观察后发现，a、b、c实际上相互连通，因此它们属于同一处病变。所以，单凭一张电镜图所能呈现的信息极为有限，统计结果也可能存在较大误差。

统计线粒体与内质网距离等相关数据。我们直接用模式图举例，看看不同切面对结果的影响有多大。

我们能看到绿色、蓝色以及黑色不同的切面。不同切面下呈现的距离都不相同，而且我们要统计不同组的细胞器距离，那你怎么保证每个细胞获得的电镜图都是基于同一个切面？。即使是同一个细胞，不同切面得出的结果也可能不同，存在一定差异，那怎么保证客观，控制变量呢？

参考资料：

Tenofovir renal toxicity targets mitochondria of renal proximal tubules

https://abdominalkey.com/anatomy-of-the-kidney/

Ultrastructural Pathology of the Cell and Matrix