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做cck8/MTT一定要避开这些坑!
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细胞活力检测细胞增殖细胞毒性CCK8法MTT法96孔板酶标仪OD值测定吸光度检测贴壁细胞悬浮细胞细胞培养药物处理阴性对照复孔设计细胞悬液实验优化
1、若是加药测细胞活力,首先判断是否带有颜色?若有颜色很可能与cck8/MTT反应,导致所有孔的od值乱乱的,这是需要做阴性对照,也就是:没有细胞,只加药的孔~最后:有细胞的孔od值➖阴性对照od值🟰最终od值
2、96孔板四周边缘的孔,不要加细胞检测,有概率污染,可以用pbs补充。
3、96孔板有些盖子和孔板不是很贴合,盖上以后检查一下是否完全盖上了?有些孔板需要大力磕一下才能完全盖上,盖不紧的话容易污染。
4、处理24小时可以用100ul细胞悬液,若处理48小时甚至更久,建议用200ul细胞悬液,但细胞量不变,只改变体积即可!细胞量可用1万/100ul~
5、可做5个复孔,od值测出来后,舍去最大值and最小值,剩下的3个值作图,尽可能减少非必要的重复!
6、酶标仪测吸光度时,尽量不要有气泡,若有过多气泡,如果实验室有吹风机,可以用吹风机斜着吹1~2秒,气泡会立马消失的,不会影响结果~
7、96孔板铺板不需要特意摇晃孔板混匀哦,细胞加进去即可,加药,加cck8以后,用手轻拍孔板侧边就行,然后再放入培养箱。
8、贴壁细胞比较简单,可换液,悬浮细胞铺板以后就不要再换液了。
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