本课程聚焦CRISPR/Cas9内源基因敲入荧光标签的完整实操思路，带你从原理到设计再到验证，掌握用EGFP、mCherry等标签实时监测目标基因表达与定位的方法。适合生命科学、医学、生物技术领域的研究生、科研人员，以及希望开展基因编辑实验的入门者。你将学会：依据基因结构和功能需求选择N端或C端插入位点；设计靠近插入位点的sgRNA，并判断PAM是否需要同义突变；构建包含同源臂、柔性linker、荧光标签和终止信号的donor模板；通过PX459与donor共转染或电转，结合荧光观察验证敲入并推进稳定细胞系建立。课程重点解决位点选择、再切割规避和donor设计等关键难点，帮助你少走弯路，快速把CRISPR敲入标签应用到实际课题中。