本课程围绕基因编辑与分子克隆的关键实操展开，带你从“设计”走到“验证”。课程首先以人类目标基因为例，演示如何从 NCBI 获取序列、定位外显子，使用 CHOPCHOP 设计并筛选 sgRNA，再通过 NCBI BLAST 评估靶向特异性，同时讲解引物与寡核苷酸订购参数。随后进入湿实验环节，详细拆解双酶切 50 μl 体系配制、DNA 用量与加样顺序、酶操作规范，以及 1% 琼脂糖凝胶制备、上样、电泳和紫外切胶回收前处理。课程适合生物医学、分子生物学、基因编辑方向的本科生、研究生和实验新手，也适合需要规范实验流程的科研人员。学完后，你将掌握 sgRNA 设计与脱靶初步判断，能独立完成双酶切和凝胶电泳操作，理解从序列分析到实验验证的完整逻辑，为后续克隆与基因编辑实验打下扎实基础。