本课程带你用 R 语言和 limma 包，从 OTU/表达数据出发，完整走通差异分析与火山图绘制流程。课程不止教画图，更强调实战：本地安装 limma，整理并转置数据，按行均值筛选高丰度特征，设置 CK 与 A 分组及 levels，完成差异分析并输出 logFC、adj.P.Val。随后你会学会按显著性阈值和 |logFC| 阈值标注显著、上调、下调、稳定，并绘制基础火山图、加阈值线火山图、up/down/stable 三分类火山图，掌握颜色、透明度、点大小、线型等美化参数。课程还提醒低丰度数据过多导致趋势图“先上后下”时，如何通过降低筛选比例进行质控调整。适合刚开始做微生物组、转录组或 OTU 差异分析，想快速掌握 R/limma 与火山图可视化的学生和科研人员。学完后，你能独立完成从数据筛选、差异分析到火山图调整的全流程，并理解 adj.P.Val、logFC、up/down/stable 的实际含义，也能按需调整筛选比例和显著性阈值。